Kaip išmatuoti bakterijų augimą

Turinys

• etapai
• 1 metodas Tiesiogiai stebėkite bakterijas
• 2 metodas Biomasės matavimas
• 3 metodas Atliekamas drumstumas

Šiame straipsnyje: Tiesioginis bakterijų stebėjimas. Matuojama biomasė. Procedūra atliekama pagal drumstumo nustatymą8

Bakterijų augimą galima išmatuoti keliais būdais, o kai kuriuos įgyvendinti yra sunkiau nei kitus. Paprastai naudojami paprasčiausi ir gaunami gana tikslūs rezultatai, su sąlyga, kad matuojant jie yra tikslūs. Dažniausiai naudojami būdai yra bakterijų stebėjimas ir skaičiavimas, biomasės ir sausos biomasės matavimas bei drumstumo nustatymas. Jūsų mokyklos laboratorijoje turėtų būti įranga, reikalinga bent vienam iš šių metodų.

etapai

1 metodas Tiesiogiai stebėkite bakterijas

1. 
   

   
   Paruoškite įrangą. Be to, kas paprastai randama visose biologijos laboratorijose, jums reikės ir tam tikrų daiktų. Įsitikinkite, kad po ranka turite visus prietaisus ir talpyklas, kad nereikėtų eiti atgal ir atgal į spintą, kurioje laikoma įranga. Iš anksto pagalvokite, ką darysite, kad žinotumėte, ką naudosite kiekviename etape. Jūs taip pat turėsite žinoti keletą pagrindinių terminų.
   • Gaukite hemacitometrą. Tai yra ašmuo su skaičiavimo kameromis, susietas su mikroskopu. Tai labai lengva priemonė, kurią galima pritaikyti ir naudoti. Kai kuriuos galite rasti iš tiekėjų, kurių specializacija yra įranga mokykloms ir tyrimų laboratorijoms. Paprastai pateikiamas vartotojo vadovas.
   • Paimkite Petri patiekalą. Tai nedidelis, apvalus, seklus indas, kuriame galite stebėti bakterijas.
   • Sąvoka „kultūra“ reiškia mikroorganizmą, dirbtinai padaugintą kaip mokslinio eksperimento dalis.
   • „Kultūros sultinys“ yra terpė, kurioje vystysis kultūra.

2. 
   

   
   
   
   Naudokite Petri patiekalą. Įdėkite bakterijas į dėžę ir stebėkite jas mikroskopu. Taip pat galite įdėti jį tiesiai į skaidrę. Tada suskaičiuokite bakterijų ląstelių skaičių.

3. 
   

   
   Įsitikinkite, kad turite tinkamą koncentraciją. Jei bakterijų yra per daug, jos persidengs ir negalėsite jų teisingai suskaičiuoti. Jei taip yra, praskieskite kultūrą, sumaišydami su trupučiu sultinio. Jei jų yra per mažai, rezultatas nebus reikšmingas. Tada turite filtruoti sultinį, kad padidintumėte koncentraciją.

4. 
   

   
   Suskaičiuokite bakterijas. Paskutinis žingsnis yra tiesiog suskaičiuoti. Pažvelkite į skaičiavimo kameras po mikroskopu ir atkreipkite dėmesį į matomų ląstelių skaičių. Palyginkite rezultatą su kitomis panašiomis patirtimis.

2 metodas Biomasės matavimas

1. 
   

   
   
   
   Patikrinkite, ar turite reikiamus instrumentus. Šis metodas įgyvendinamas lėtai ir apima brangios įrangos naudojimą. Jei neplaunate, naudokite kitą techniką. Kita vertus, jei jūsų lankomoje laboratorijoje yra tinkami įrankiai, biomasės ir sausosios masės matavimas yra idealus, nes jie pateikia tikslius rezultatus. Jums reikia:
   • priverstinės konvekcijos hidraulinė krosnelė,
   • aliuminio svarstyklės,
   • kelios Erlenmejerio kolbos,
   • centrifuga arba laboratorinė filtravimo sistema.

2. 
   

   
   Patikrinkite, ar pasėliai yra Erlenmejerio kolboje. Jei to nėra, supilkite. Šiame eksperimento etape bakterijos vis dar yra kultūros sultinyje. Vėliau jie bus atskirti.

3. 
   

   
   Išdžiovinkite svėrimo indą. Dėl to įdėkite į orkaitę. Taip pat galite naudoti 47 mm skersmens celiuliozės acetato membraninį filtrą su 0,45 μm poromis. Nesvarbu, kuris įrankis bus naudojamas, tiksliai išmatuokite jo masę, kad jį būtų galima atimti iš rezultatų, kuriuos gausite įdėję pasėlį.

4. 
   

   
   Išmaišoma. Maišykite lerlenmeyer, kad kultūra būtų vienalytė. Iš tiesų, dėl sunkumo, ląstelės natūraliai linkusios kristi į konteinerio dugną. Taigi jūs turite šiek tiek purtyti, nes jie yra paskirstyti vienodai ir kad jūsų pavyzdys yra reprezentatyvesnis.

5. 
   

   
   Centrifuga. Centrifuguokite bakterijas nuo kultūros sultinio. Šis įtaisas naudojamas konteineriui ir atsvarui pasukti labai dideliu greičiu. Sultinys teka, kuris sulaiko tik gyvas medžiagas. Norėdami gauti daugiau informacijos, rasite informacijos apie tai, kaip naudoti centrifugą internete.

6. 
   

   
   Gaukite tešlą. Nukoškite jį ant sveriančios keptuvės. Galite mesti kultūros sultinį, jums jo nebereikės, bet laikykite lerlenmeyer po ranka.

7. 
   

   
   Nuplaukite centrifugą. Supilkite skalavimo vandenį į svėrimo indą kartu su bakterijų ląstelėmis. Rezultatas, gautas naudojant viską, suteikia biomasės.

8. 
   

   
   Raskite sausą masę. Norėdami sužinoti apie sausą mėginio biomasę, įdėkite svėrimo indą į krosnį, nustatytą 100 ° C temperatūroje 6–24 valandoms, laikydamiesi instrukcijų, pateiktų kartu su jūsų prietaisu. Būkite atsargūs, neviršykite šios temperatūros, kad nesudegintumėte bakterijų. Tada viską pasverkite, tada atimkite padėklo masę.

3 metodas Atliekamas drumstumas

1. 
   

   
   Paruoškite savo įrangą. Jums reikės šviesos šaltinio ir spektrofotometro, prietaiso, esančio daugumoje mokslo laboratorijų. Žiūrėkite pateiktame vartotojo vadove, nes kiekvienas modelis veikia atskirai. Šis metodas yra vienas iš dažniausiai naudojamų matuojant bakterijų augimą, nes jam reikalingi tik nebrangūs ir lengvai naudojami įrankiai.

2. 
   

   
   Įtraukite šviesą į kultūrą. Drumstumas naudojamas įvertinti skysčio turinį dalelėse, jis nustatomas, ar jis yra daugiau ar mažiau drumstas. Rezultatas, kurį gausite atlikus šį matavimą, bus pateiktas NTU (arba nephelometrinio drumstumo vienetai). Norint tiksliai išmatuoti mėginio drumstumą, gali reikėti atlikti prietaiso kalibravimą.

3. 
   

   
   Padarykite užrašus. Drumstumas yra bakterijų kiekis mėginyje. Spektrofotometras taip pat leis jums sužinoti tirpalo pralaidumą (% T), kurio vertė yra atvirkščiai proporcinga drumstumui. Tada palyginkite skirtingų mėginių rezultatus, kad išmatuotumėte bakterijų augimą.