Kaip atpažinti bakteriją

Turinys

• etapai
• 1 metodas Nustatykite bakteriją pagal Gram dažymą
• 2 metodas Atlikite Ziehl-Neelsen dažymo testą
• 3 metodas Ištirti bakterijų elgseną ir išvaizdą
• 4 metodas Interpretuokite visus rezultatus

Šiame straipsnyje: Nustatykite bakteriją pagal dažymą gramais. Atlikite Ziehl-Neelsen dažymo testą. Ištirkite bakterijų elgseną ir išvaizdąTirti visus rezultatus43 Nuorodos

Bakterijų identifikavimas yra sudėtingas uždavinys. Viena iš priežasčių yra ta, kad, remiantis skaičiavimais, pasaulyje yra nuo 10 000 iki 1 milijardo bakterijų rūšių! Tinkamai nustatyti bakterijas yra labai svarbu, ypač medicinos srityje, kur tinkamas ligos gydymas daugiausia priklauso nuo mikrobą sukeliančių problemų. Daugeliu atvejų identifikacija atliekama pašalinimo pagrindu. Norėdami identifikuoti bakteriją, turite atlikti dažymo testus, išanalizuoti jos išvaizdą ir stebėti, kaip ji gerai reaguoja į skirtingas sąlygas. Jei jums reikia greito rezultato, paimkite DNR mėginį, kurį nusiųsite į laboratoriją.

etapai

1 metodas Nustatykite bakteriją pagal Gram dažymą

1. nustatyti jei bakterijos yra gramteigiamos arba neigiamos. Dėmimas gramais yra būdas paskirstyti bakterijas tarp dviejų labiausiai paplitusių tipų: gramteigiamo ir gramneigiamo. Pirmieji turi storą ląstelių sienelę, susidedančią iš polimero, vadinamo peptidoglikanu, kuris geriausiai nusidažo kaip gramneigiamų bakterijų plonos sienos.
   • Kai kurios įprastos gramteigiamų bakterijų rūšys yra streptokokai, stafilokokai, mikrokokai (arba mikrokokai) ir listeria.
   • Čia yra keletas gramneigiamų bakterijų pavyzdžių: Neisseria, Acinetobacter, Moraxella, Enterobacteriaceae, Vibrio, Haemophilus, Fusobacterium ir Campylobacter.
2. Imkitės tinkamų apsaugos priemonių. Bakterijos ir cheminiai elementai, kuriuos naudosite bandymo metu, kelia pavojų jūsų sveikatai. Atlikdami dažymo bandymą, mūvėkite apsauginius akinius, vienkartines nitrilo pirštines ir laboratorijos paltą. Baigę dėkite pirštines ir visas kitas užterštas medžiagas į specialų maišą. Nepamirškite laikytis savo laboratorijos procedūrų, kad atsikratytumėte užterštų produktų maišelio.
3. Padėkite stebimą pavyzdį ant stiklinės stiklelio. Norėdami pradėti tyrimą, ant sterilios plokštelės uždėkite lašą ar bakterijų mėginį. Tada pastumkite ašmenis per tris kartus užsidegtą „Bunsen“ degiklį, kad pritvirtintumėte mėginį ir išvengtumėte jo iškritimo iš plokštelės, kai skalaujate ar pridedate reagentų.
4. Į ašmenis įpilkite 5 lašus purpurinio kristalo. Ant mėginio užpilkite penkis lašus krištolo violetinės spalvos tirpalo. Palaukite minutę, kol mėginys absorbuotų krištolo violetinę.
   • Laikykite ašmenis vietoje drabužių segtukų, kad nenudažytumėte rankų.
5. Gerai nuplaukite peiliuką, kad pašalintumėte dėmę. Naudokite čiaupą arba išspaustą buteliuką ir leiskite vandeniui tekėti labai lėtai iki penkių sekundžių, kad pašalintumėte rašalo likučius, kurie neprilipo prie mėginio.
6. Ant stiklelio užpilkite penkis lašus gramačio diodo dėmės. Tai tirpalas, sudarytas iš diodo, natrio bikarbonato ir kalio diodido, dėl kurio krištolo violetinė tirpsta su bakterijų ląstelių sienelėmis. Ant mėginio užpilkite penkis lašus tirpalo ir palikite vieną minutę.
7. Mėginys plaunamas alkoholiu arba pieno rūgštimi. Alkoholis ir lacetonas yra balikliai ir pašalins bakterijų ląstelių sienelių dažymą, jei jie yra gramteigiami. Ant mėginio užpilkite kelis lašus baliklio ir leiskite jam veikti ne ilgiau kaip tris sekundes. Po to pabandykite penkias sekundes švelniai nuplauti vandeniu, kad pašalintumėte šias balinančias medžiagas.
   • Jei leisite balikliui veikti ilgą laiką, gali išnykti gramneigiamų bakterijų dažymas, dėl ko gali atsirasti klaidingai neigiamas rezultatas.
8. Atlikite kontrasto testą su safraninu. Safraninas yra raudonas dažiklis, kontrastuojantis su krištolo violetiniu spalva, tokiu būdu nudažydamas bakterijas, nepaveiktas purpurinės spalvos. Ant mėginio užpilkite maždaug penkis lašus safranino ir palikite vieną minutę. Po to pabandykite penkias sekundes švelniai nuplauti vandeniu.
9. Pavaizduokite savo pavyzdį padidindami 1 000 kartų. Bakterijos taps purpurinės arba purpurinės, jei jos yra gramteigiamos, arba rausvos, jei jos yra gramneigiamos dėl safranino.

2 metodas Atlikite Ziehl-Neelsen dažymo testą

1. Naudokite šią techniką, kad aptiktumėte greitai rūgštines bakterijas. Šios rūšys turi didesnį lipidų kiekį, todėl jos yra atsparesnės dažams, naudojamiems dažant „Gram“. Rūgštims atsparios bakterijos priklauso Mycobacterium genčiai, kuriai priklauso už tuberkuliozę (M. tuberculosis) atsakinga bakterija. Norėdami dažyti rūgščiai atsparią bakteriją, turite naudoti raudoną dažiklį, vadinamą karboliniu fuksinu, atspariu skalavimui rūgštinėmis arba sieros rūgšties tirpalais.
2. Imkitės tinkamų apsaugos priemonių. Cheminės ir biologinės medžiagos, naudojamos dažant „Ziehl-Neelsen“, gali būti pavojingos. Be to, jums taip pat reikės naudoti šilumos šaltinius, tokius kaip „Bunsen“ antgalis, elektrinis šildytuvas ar alkoholio lemputė. Vykdykite toliau pateiktas instrukcijas, kad atliktumėte testą.
   • Užsidėkite akinius, nitrilo pirštines ir laboratorinį paltą.
   • Neįkvėpkite dažų ir baliklių garų ir neleiskite, kad lašeliai išpūstų jūsų akis ar odą. Laikykite konteinerius atvirus po gaubtu.
   • Šildant peiliuką, būkite labai atsargūs. Daugelis naudojamų chemikalų yra degios. Ant skaidrių ar kitos įrangos taip pat gali būti liepsnių medžiagų pėdsakų.
3. Paruoškite ašmenis. Sukamaisiais judesiais tolygiai paskirstykite nedidelį bakterijų mėginio kiekį sterilios plokštelės centre. Jūsų pavyzdys turėtų užimti apie 10 mm iki 20 mm.
4. Džiovinkite ašmenis. Uždėkite ašmenis ant džiovinimo konstrukcijos, bandinį nukreipdami į viršų. Leiskite natūraliai išdžiūti 30 sekundžių. Nemėginkite išdžiovinti ašmenų šluoste.
5. Užtvirtinkite mėginį karščiu. Mėginį pakeldami, du ar tris kartus pastumkite ašmenis per apšviestą Bunseno degiklį. Ašmenis taip pat galite uždėti ant elektrinio šildytuvo, nustatydami temperatūrą nuo 65 ° C iki 75 ° C bent dvi valandas. Būkite atsargūs, neužvirkite ir nesudeginkite mėginio.
6. Į ašmenis įpilkite karbolinio fuksino. Ant stiklelio užpilkite kelis lašus šio tirpalo. Supilkite pakankamai, kad mėginys būtų visiškai uždengtas.
7. Kaitinkite ašmenis, kad pritvirtintumėte dažus. Atsargiai pašildykite stiklelį virš „Bunsen“ degiklio ar alkoholio lempos, mėginį nukreipdami į viršų, arba padėkite ant elektrinio šildytuvo. Kaitinkite ašmenis iki 60 ° C arba tol, kol jie pradės skleisti garus. Leiskite dažams veikti penkias minutes.
   • Jei naudojate elektrinį šildytuvą, įjunkite jį 60 ° C temperatūroje. Jei pasirinksite alkoholio lempą arba „Bunsen“ degiklį, turėtumėte tikėtis, kad matysite dūmus.
   • Kad ašmenis penkias minutes palaikytų norimoje temperatūroje, periodiškai pašildykite.
   • Būkite atsargūs, kad mėginys neužvirtų, nesudegtų ir neišdžiūtų.
8. Ašmenis nuplaukite šaltu vandeniu. Leiskite jam atvėsti penkias minutes ir keletą sekundžių švelniai nuplaukite švariu vandeniu. Norėdami pašalinti dažų dėmes, kurios neprilipo prie mėginio, naudokite vandenį iš čiaupo arba buteliuką.
9. Supilkite ant mėginio rūgščią alkoholį arba sieros rūgštį. Norėdami visiškai uždengti mėginį, naudokite 3 tūrio proc. (Tūrio%) alkoholio arba 20 proc. Sieros rūgšties. Leiskite rūgščiai veikti, kol spalva išblės ir įgis labai ryškiai rausvą atspalvį. Paprastai procesas trunka apie dešimt minučių.
10. Ašmenis nuplaukite švariu vandeniu. Švelniai nuplaukite peilį po čiaupu ar naudodamiesi išspaustu buteliu. Gerai pašalinkite visas rūgščių ir dažų liekanas.
11. Įpilkite kontrastinės medžiagos. Kai nuplaukite stiklelį, užpilkite ant malachito žalios arba metileno mėlynos spalvos. Šie du tirpalai sukuria melsvą ar žalsvą foną, ant kurio atsiras raudonas dažiklis, taip pat kitas biologines medžiagas, tokias kaip žmogaus ląstelės ir rūgščiai neatsparios bakterijos. Leiskite medžiagoms veikti vieną ar dvi minutes.
12. Nuplaukite ir nusausinkite peiliuką. Kruopščiai nuplaukite vandeniu, kad pašalintumėte perteklių. Baigę išdžiovinkite ašmenų galinę dalį sausu skudurėliu ir leiskite natūraliai išdžiūti ant stovo.
13. Pavaizduokite savo pavyzdį padidindami 1 000 kartų. Rūgštims atsparios bakterijos taps raudonos arba tamsiai rožinės spalvos. Kitos bakterijos, nebakterinės ląstelės ir mentės pagrindas taps žalios arba mėlynos spalvos.

3 metodas Ištirti bakterijų elgseną ir išvaizdą

1. Išanalizuokite bakterijų formą. Atlikę dažymo testą, kad nustatytumėte, ar bakterijos yra gramteigiamos, gramneigiamos ar atsparios rūgštims, laikas tiksliau nustatyti rūšis. Pirmiausia išanalizuokite bakterijų formą skaidrėje. Trys dažniausiai pasitaikančios formos yra kokciai (sferiniai), spiralės ir bacilos (lazdelės formos).
   • Yra keletas šių formų variantų. Apvalios formos bakterijos (kokosas), pavyzdžiui, gali atsirasti poromis (diplokokai), grandinėmis, krūvomis arba keturiomis grupėmis (tetradai).
2. Sužinokite, ar bakterijos yra aerobinės, ar anaerobinės. Paimkite du bakterijų mėginius ir sukurkite dvi atskiras kultūras. Mėnulis turi būti anaerobinis (užaugęs be deguonies), o kitas - aerobinis (užaugęs deguonimi). Prieš stebėdami augimą, anaerobinę kultūrą bent 48 valandas laikykite 35 ° C temperatūroje be deguonies.
   • Jei bakterijos auga aplinkoje, kurioje nėra deguonies, bet nėra veikiamos deguonies, tai reiškia, kad jos yra anaerobinės.
   • Nors jie vystosi deguonies prisotintoje aplinkoje, bet ne trūkstant deguonies, jie yra aerobiniai.
   • Kai jie vystosi abiejose aplinkose, mes kalbame apie fakultatyvias anaerobines bakterijas.
3. Atlikite judrumo testą. Bakterija yra mobili, jei ji gali judėti viena su viena ar daugiau žvynelių. Judėjimo laipsnis yra labai svarbus nustatant tam tikras bakterijų rūšis. Yra keletas judesių tipų, tačiau saugiausias ir aiškiausias būdas yra pusiau kieta terpė.
4. Sukurkite judėjimo testo kultūrą. Paruoškite bakterijų kultūrą kultūros sultinyje. Norėdami paruošti pasirinktą sultinį, vykdykite toliau pateiktas instrukcijas.
5. Kultūra pasėjama į pusiau kietą agarą, kad būtų galima ištirti judrumą. Dalį sultinio kultūros uždenkite sterilia sėjimo adata. Atsargiai įmeskite adatą į pusiau kietą dagaro vamzdelį, pavyzdžiui, TTC lagar, kurį paruošėte bandymui. Adata turi prasiskverbti per 2/3 agaro.
   • Baigę atsargiai išimkite adatą, neviršydami sėjimo zonos ribų.
   • Inkubuokite mėgintuvėlį 30 ° C temperatūroje 48 valandas.
6. Perskaitykite testo rezultatą. Judrumo bandymo agaras, susilietęs su bakterijomis, pasidarys raudonas. Jei jie yra mobilūs, šis raudonas arba rausvas atspalvis pasiskirs visoje medžiagoje. Priešingu atveju dažymas bus atliekamas tik injekcijos vietoje.

4 metodas Interpretuokite visus rezultatus

1. Surinkite savo komentarus. Norėdami žinoti bakterijų rūšis, turėsite surinkti informaciją, gautą iš kultūrų, atlikti dažymo testus ir stebėti formas. Jei tiriate paciento mėginius, jo simptomai taip pat gali padėti nustatyti tinkamą bakterijų tipą.
   • Pvz., Jei tyrimai rodo, kad bakterijos yra gramneigiamos, anaerobinės, nemotyvuotos, ir pastebite pacientui tokius simptomus kaip pilvo skausmas, pykinimas ir vėmimas, tikėtina, kad pacientas kenčia nuo Bacteroides infekcijos. fragilis.
2. Ieškokite duomenų bazės. Pasaulyje yra tūkstančiai rūšių bakterijų. Neįmanoma visko žinoti iš širdies. Jums greičiausiai reikės ieškoti klinikinės mikrobiologijos knygos ar internetinės duomenų bazės, kad palygintumėte tyrimų rezultatus su informacija apie bakterijų rūšis.
   • Yra puikūs internetiniai šaltiniai bakterijoms identifikuoti, tačiau dauguma šių duomenų bazių yra anglų kalba, įskaitant Patricbrc.org ir GlobalRPh. Vis dėlto naudingos informacijos vis dar galite rasti INRA tarptautinio mikrobų išteklių centro tinklalapyje.
3. Norėdami sužinoti tikslią bakterijų rūšį, atlikite genetinį testą. Kai kuriais atvejais gali reikėti nustatyti bakterijų rūšis. Greičiausias ir lengviausias metodas yra atlikti DNR testą. DNR tyrimai taip pat naudingi nustatant bakterijas, atsparias tradicinėms dažymo formoms ir kultūrai. Šiais laikais labai greitai atliekami mikroorganizmų DNR tyrimai ir jie gali būti paruošti per mažiau nei dvi valandas.
   • Jei neturite galimybės patekti į laboratoriją, kurioje vykdoma genetinė mikroorganizmų seka, nusiųskite bakterijų mėginį į specializuotą agentūrą.